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CCK-8法或称WST-8法细胞活性检测及Cell Counting Kit-8试剂盒促销

 

CCK-8法(或称WST-8法)细胞活性检测方法简介

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)细胞活性检测试剂中含有WST-8,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。Cell Counting Kit-8法的优点: 1、使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂; 2、CCK-8法能快速检测; 3、CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度; 4、CCK-8法的重复性优于MTT法; 5、CCK-8法对细胞毒性小; 6、CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。  它的缺点: 1、与MTT法相比,CCK-8和XTT的价格比较贵。 2、Cell Counting Kit-8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加。


CCK-8法和MTT法比较研究的文献参考

点击查看>>> CCK-8法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比较研究

参考文献摘要:以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,探讨了CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。Cell Counting Kit-8的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102-1×105个。在检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞的增殖影响实验中,发现Cell Counting Kit-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小。实验结果表明CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

点击查看>>> MTT法和CCK-8法检测细胞活性之测试条件比较

参考文献摘要:利用HL60作为研究对象,对比了MTT法和CCK-8法在最佳检测时刻和检测波长等参数的差异。对于CCK-8法,最佳测试时刻在细胞液培养4 h后,最佳测试波长为490 nm。实验结果表明用CCK-8法检测的OD值与活细胞数的线性相关度要优于MTT法,是一种灵敏度较高、重复性好的的细胞活性检测方法。

全文下载:MTT法和CCK-8法比较研究之全文


Cell Counting Kit-8法和MTT法的区别

CCK-8法或称WST-8法

MTT法

1

还原后的Formazan是水溶性的
(不需要溶解)

还原后的Formazan是非水溶性的
(需要加有机溶剂溶解)

2

重现性好

由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan,故有时重复性略差

3

操作简便

操作繁琐

4

测定波长:450~490nm

测定波长:550~600nm

5

为1瓶溶液,无需预制,即开即用

由于需要加有机溶剂溶解,工作量比较大


Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)产品订购信息

   品牌               货号                     产品名称                      包装规格          促销价格         货期
DOJINDO      CK04-500        Cell Counting Kit-8 试剂盒        500 Tests          998元           现货
DOJINDO      CK04-1000      Cell Counting Kit-8 试剂盒       1000 Tests         1668元          现货
DOJINDO      CK04-3000      Cell Counting Kit-8 试剂盒       3000 Tests          请询价          现货

上海华雅思创生物销售的Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)是从日本进口的,由日本Dojindo开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法,试剂盒中采用Dojindo开发的水溶性四唑盐-WST-8,在日本、美国、欧洲等国家均持有专利和注册商标。上海华雅思创生物科技有限公司在上海仓库备有现货,并严格按照产品的最佳储存条件进行储存与管理,我们的一贯宗旨是:更用心地为中国广大科学研究工作者提供更安全、更放心、更便捷的服务。

Cell Counting Kit-8试剂盒图片

欲了解详细信息请电话咨询

 

CCK-8试剂盒的主要产品特性及应用

★ 操作简便,省时省力
★ 水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
★ 无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
★ 为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
★ 适合于高通量药物筛选

WST-8的用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
WST-8的使用:CCK-8试剂盒在中国中科院、北京大学、复旦大学、中山大学、四川大学、武汉大学等知名科研院所、三甲医院的中心实验室广泛应用,受到国际科研者的高度评价,使用CCK-8发表的文献达600多篇,其中截止2008年底SCI影响因子IF>10分的论文有37篇,最高IF26.5分。

 

关于CCK-8法的问题和答案

1. Cell Counting Kit-8法实验中每孔应该接种多少细胞?

贴壁细胞每孔至少需要接种1,000个细胞 (100 mL的培养基),检测白细胞时由于它的灵敏度较低,每孔至少需要接种2,500个细胞 (100 mL的培养基),建议先做几个孔摸索接种细胞的数量。如果要使用24孔板或是6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

2. 如何设定空白对照?

在不含细胞的培养基中加入CCK-8,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验 (细胞毒性实验) 时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中测定450 nm的吸光度作为空白对照。

3. 哪些物质会影响CCK-8的测定?

当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,增加OD值,例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定 )。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。

4. 在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?

有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK-8试剂发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。

5. CCK-8对细胞是否有毒?

CCK-8对细胞的毒性相当低,同样的细胞在CCK-8法检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验,如结晶紫检测法,中性红检测法或DNA荧光检测法等。

6. Cell Counting Kit-8试剂稳定吗?

CCK-8在避光0~5℃的条件下可以存放1年,在-20℃下避光可以保存2年。如果需要长期保存,我们推荐在-20℃储藏。

在常温下可以保存3周左右,颜色应该为浅红色,如果颜色发生改变,则可能会增加空白吸光度。

7. 我没有450 nm的滤光片,还可以使用哪些其他的滤光片?

您可以使用吸光度在430~490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

8. CCK-8能否对活细胞进行染色?

不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®-8),并通过电子载体1- Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST®-8上,因为WST®-8及其生成的甲瓒染料是高度水溶性的,不会进入细胞内,所以CCK-8不能对活细胞进行染色。

9. 必须设定参比波长吗?设定的目的是什么?

不一定要设定,WST-8试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。

10. 如果OD值太低,可以采取什么办法?

可以采取2个办法:
① 适当增加细胞数量。
② 延长加入WST-8试剂后的染色时间。


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